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本试剂盒提供了一种快速、灵活的方法，适用于新鲜或冷冻全血(用柠檬酸盐、EDTA或肝素等抗凝剂处理过的样品)提取总DNA，包括基因组DNA和线粒体DNA。本制品可以灵活处理0.1～20mL的全血，采用非离心柱的方法，无需使用苯酚、氯仿等有机溶剂，有效去除蛋白、色素、脂类及其它抑制性杂质污染。整个过程在一个管中操作，减少了污染及样本混淆的风险。提取的DNA产量高、质量好，可直接用于PCR、荧光定量PCR、酶切和Southern Blot以及文库构建等实验。

• 纯度高：提取的基因组DNA可直接用于下游PCR、荧光定量PCR、酶切等各种实验。
  
• 提取量大：可从0.1～20mL的全血中提取DNA，无需使用苯酚、氯仿等有机溶剂。
  
• 兼容性强：适用于处理各种血液和细胞样本。

• 向Proteinase K中加入1.25mL的Proteinase K Storage Buffer使其溶解，-20℃保存。配制好的Proteinase K勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。
  
• 所有离心操作均在室温下完成。
  
• 血液样品反复冻融，会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。所得基因组DNA也
  应尽可能避免反复冻融，以免降解。如果提取冷冻血液的基因组DNA，建议37℃水浴，迅速解冻后再进行后续操作。
  
• 血液样品的储存：
  
  • 短期保存：已加入抗凝剂的血液样品可在2～8℃储存最多10天，对于某些实验例如Southern杂交等，需要得到完整全长的基因组DNA，请将血液样品在2～8℃储存不超过3天，此时基因组DNA的降解程度较轻。
    
  • 长期保存：已加入抗凝剂的血液请置于-70℃保存（如果提取的是高分子量的DNA，推荐使用EDTA作为抗凝剂）。

• 取300μL全血于2mL离心管(自备)中，加入300μL(样本等体积)Buffer FG1，上下颠倒混匀5次，10000×g离心30秒，弃上清。
  
• 再向离心管中加入450μL(1.5倍样本体积)Buffer FG1，涡旋震荡，使沉淀完全分散。10000g离心30秒，弃上清，并把离心管倒置于干净的吸水纸上，放置2分钟。
  注意：在极少情况下沉淀可能会松弛，所以要缓慢倒掉上清。将离心管倒置在吸水纸上，可以减少管壁上清的回流。
  
• 按照附表配制Buffer FG2与蛋白酶K的混合液(比例100:1)。
  注意：此混合液最好现用现配.井在配好后1小时之内用完。
  
• 加入150μL的Buffer FG2与蛋白酶K的混合液，立即涡旋混匀至溶液无团块。
  注意：
  
  • 如果有多个样品同时操作，加入Buffer FG2/蛋白酶K混合液后立即涡旋震荡，不要等所有样品部加完后再震荡。
    
  • 通常涡旋震荡3～4次.毎次5秒，可以使沉淀充分悬浮，如果涡旋震荡后发现沉淀中含胶状物质可以再加入30μL的Buffer FG2/蛋白酶K混合液，再次混旋混匀。
• 65℃孵育10分钟，其间颠倒混匀数次。
  注意：如果样品颜色从红色变成橄榄绿说明蛋白消化完全。
  
• 加入150μL导丙醇，上下颠倒彻底混匀直至出现丝状或簇状基因组DNA。
  注意：与异丙醇完全混合对于沉淀DNA非常重要。如果样品中白细胞含量少，可能看不到DNA，则至少上下频倒高心管20次确保沉淀完全。
  
• 10000×g离心5分钟。
  注意：如果沉淀贴壁不牢，可以适当延长离心时间或増大离心力。
  
• 弃上清，并把离心管倒置于干净的吸水纸上吸干。
  注意：少数时候沉淀可能贴壁不牢，注意不要吸弃沉淀。
  
• 加入300μL的70%乙醇，涡旋震荡5秒，10000×g离心5分钟，弃上清。
  注意：如果沉淀贴壁不牢，可以适当延长离心时间或増大离心力。
  
• 把离心管倒置于干净的吸水纸上5分钟，确保沉淀在管中。
  注意：在管底可见白色的DNA沉淀，在极少情況下沉淀可能会松弛，所以要缓慢倒掉上清。
  
• 空气干燥DNA沉淀直至所有的液体挥发干净(至少5分钟)。
  注意：乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验，但避免过度干操DNA沉淀，因过度干燥会使DNA难于溶解。
  
• 加入200lμl的Buffer GE，低速涡旋5秒，65℃孵育1小时溶解DNA，期间轻弹数次助溶。-20℃保存DNA。
  注意：如果DNA没有完全溶解，可室温过夜。如果使用少量的FG3溶解DNA，建议延长孵育时间。

• 取3mL全血于15mL离心管(自备)中，加入3mL(样本等体积)Buffer FG1，上下颠倒混匀5次，2500×g离心5分钟，弃上清。
  
• 再向离心管中加入4.5mL(1.5倍样本体积)Buffer FG1，涡旋震荡，使沉淀完全分散。2500×g离心5分钟，弃上清，并把离心管倒置于干净的吸水纸上，放置2分钟。
  注意：在极少情况下沉淀可能会松弛，所以要缓慢倒掉上清。将离心管倒置在吸水纸上，可以減少管壁上清的回流。
  
• 按照附表配制缓冲液FG2与蛋白酶K的混合液(比例100:1)。
  注意：此混合液最好现用现配，井在配好后1h之内用完。
  
• 加入1.5mL Buffer FG2/蛋白酶K混合液，立即涡旋混匀至溶液无团块。
  注意：
  
  • 如果有多个样品同时操作，加入Buffer FG2/蛋白酶K混合液后立即涡旋振荡，不要等所有样品都加完后再震荡。
    
  • 通常涡旋震荡3～4次，毎次5秒可以使沉淀充分悬浮，如果涡旋震荡后发现沉淀中含胶状物质可以再加入300lμl的Buffer FG2/蛋白酶K混合液，再次涡旋混匀。
• 65℃孵育10～30分钟，其间颠倒混匀数次。
  注意：如果样品额色从红色变成橄榄绿说明蛋白消化完全。
  
• 加入1.5mL导丙醇，上下颠倒彻底混匀直至看到DNA。
  注意：与异丙醇完全混合对于沉淀DNA非常重要。如果样品中白细胞含量少，可能看不到DNA，则至少上下颠倒离心管20次确保沉淀完全。
  
• 2500×g离心5分钟。
  注意：如果沉淀贴壁不牢，可以造当延长离心时间或増大离心力。
  
• 弃上清，并把离心管倒置于干净的吸水纸上吸干。
  注意：在管底可见自色的DNA沉淀，在极少情况下沉淀可能会松弛，所以要缓慢倒掉上清。
  
• 加入1.5mL的70%乙醇，涡旋震荡5秒，2500×g离心5分钟，弃上清。
  注意：如果沉淀贴壁不牢.可以适当延长离心时间或増大离心力。
  
• 把离心管倒置于干净的吸水纸上5分钟，确保沉淀在管中。
  注意：在极少情况下沉淀可能会松弛，所以要缓慢倒掉上清。
  
• 空气干燥DNA沉淀直至所有的液体挥发干净(至少5分钟)。
  注意：乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验，但避免过度干燥DNA沉淀，因过度干燥会使DNA难于溶解。
  
• 加入300μL的Buffer GE，低速涡旋5秒，65℃孵育1小时溶解DNA，期间轻弹数次助溶。一20℃保存DNA。
  注意：如果DNA没有完全溶解，可室温过夜。如果使用少量的FG3溶解DNA，建议延长孵育时间。

• 取10mL全血于50mL离心管(自备)中，加入10mL Buffer FG1，上下颠倒混匀5次，2500×g离心5分钟。
  
• 再向离心管中加入15mL Buffer FG1，涡旋震荡，使沉淀完全分散。2500×g离心5分钟，弃上清，并把离心管倒置于干净的吸水纸上，放置2分钟。
  注意：在极少情况下沉淀可能会松弛，所以要缓慢倒掉上清。
  
• 按照附表配制缓冲液FG2与蛋白酶K的混合液(比例100:1)。
  注意：此混合液最好现用现配，井在配好后1小时之内用完。
  
• 加入5mL Buffer FG2/蛋白酶K混合液，立即涡旋混匀至溶液无团块。
  注意：
  
  • 如果有多个样品同时操作，加入Buffer FG2/蛋白酶K混合液后立即涡旋震荡，不要等所有样品都加完后再震荡。
    
  • 通常涡旋震荡3～4次，毎次5秒可以使沉淀充分悬浮，如果涡旋震荡后发现沉淀中含胶状物质可以再加入1mL BufferFG2/蛋白酶K混合液，再次涡旋混匀。
• 65℃孵育30分钟，其间颠倒混匀数次。
  注意：如果样品颜色从红色变成橄榄绿说明蛋白消化完全。
  
• 加入5mL导丙醇，上下颠倒彻底混匀直至看到DNA。
  注意：与异丙醇完全混合对于沉淀DNA非常重要，应该至少上下颠倒离心管20次确保沉淀完全。
  
• 2500×g离心5分钟。
  注意：如果沉淀贴壁不牢，可以适当延长离心时间或増大离心力。
  
• 弃上清，并把离心管倒置于干净的吸水纸上吸干。
  注意：在管底可见白色的DNA沉淀，在极少情况下沉淀可能会松弛，所以要缓慢倒掉上清。
  
• 加入5mL的70%乙醇，涡旋震荡5秒，2500×g离心5分钟，弃上清。
  注意：如果沉淀贴壁不牢，可以适当延长离心时间或増大离心力。
  
• 把离心管倒置于干净的吸水纸上5分钟，确保沉淀在管中。
  注意：在极少情况下沉淀可能会松驰，所以要缓慢倒掉上清。
  
• 空气干燥DNA沉淀直至所有的液体挥发干净(至少5分钟)。
  注意：乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验，但避免过度干燥DNA沉淀，因过度干燥会使DNA难于溶解。
  
• 加入1mL的Buffer GE，低速涡旋5秒，65℃孵育1小时溶解DNA，期间轻弹数次助溶。-20℃保存DNA。
  注意：如果DNA没有完全溶解.可室温过夜。如果使用少量的FG3溶解DNA，建议延长孵育时间。